Тема: Аскофероз пчёл

Введение

Аскосфероз, или известковый расплод - инфекционная болезнь пчелиных <#"justify">История изучения. Географическое распространение. Экономический ущерб

Впервые болезнь, вероятно, обнаружена в конце XIX века на территории Австро-Венгрии, несколько позже в Швейцарии, Германии и России. Возбудитель впервые выделил П. Клауссен в Германии в 1912 году.

В начале XX века аскосфероз регистрировался только в некоторых странах Европы как спорадическое заболевание, а затем он распространился более чем на 50 стран с умеренным, субтропическим и тропическим климатом на всех континентах. В последние годы аскосфероз вызывает большое беспокойство, в том числе на территории Украины, России и других стран в пределах бывшего СССР.

Экономический ущерб, наносимый аскосферозом, значителен. В зависимости от интенсивности поражения расплода число взрослых пчел в семьях снижается на 23 %, способность к медосбору - на 49 %. Пораженные семьи не в состоянии обеспечить себя кормом и погибают

Биология возбудителя

Возбудитель - гриб Ascosphachera apis. Имеет септированный разнополый, т.е. мужской и женский мицелий. Мицелий в местах соприкосновения выпускает короткие боковые гифы, на которых образуются гаметы. Гриб размножается путем слияния мужских и женских ядер мицелия с последующим делением и образованием многочисленных спор, объединенных в споровые шары и заключенные в цисту. Циста со споровыми шарами называется плодовым телом. В споровых шарах содержится по 50% мужских и женских спор. Споры сильно преломляют свет, почти прозрачны, в массе имеют светло-коричневые цвет, имеют эллипсообразную форму. Размеры 1,0-2,0*2,0-2,5 мкм.

Описаны две формы гриба: апис и майор, которые различаются между собой размерами. Обе формы имеют плодовые тела, плотно заполненные спорами, которые у формы апис имеют зеленовато-коричневую окраску и более округлую форму, чем майор. У последней они бывают эллипсовидными, грушевидными и более темную окраску (вплоть до черного). У обоих форм одинаковая способность к образованию плодовых тел. Величина плодовых тел: форма апис- 49,6-82,1 (в среднем 65,9) мкм, форма майор- 88,4-168,5 (в среднем 128) мкм. Температурный оптимум для образования спор у формы майор равен C. у формы апис - C .

Хорошо растет на питательных средах для культивирования грибов с добавлением 0,4 - 0,5 % экстракта дрожжей и 7 - 15 % глюкозы. Так же растет на среде Сабуро, сусле-агаре, картофельно-глюкозном агаре. Оптимальные условия для прорастания спор, роста и споруляции: температура 31 - 35 "С, относительная влажность 92,5 % и выше, рН среды в пределах 5,0 - 7,8.

Прозрачные одноклеточные споры без видимых внутренних структур с липкой поверхностью, эллипсоидальной, почковидной формы. Женские и мужские споры гриба формируют на средах одинаковый пушистый белый мицелий, образованный ветвящимися гифами диаметром 2,5 - 6,0мкм, с небольшим количеством вакуолей.

Ферментативная активность штаммов гриба различна. Все изоляты обладают каталазой, щелочной и кислой фосфатазой, бутират-эстеразой, ДНКазой, РНКазой, лейцинаминопептидазой, р-глюкозидазой, целлюлозолитической активностью, липазами.

Споры сохраняют жизнеспособность от 3 до 35 лет, в частности более 15 лет на стенках ульев, сотах, пчеловодном инвентаре и оборудовании; в меде и перге при хранении в условиях пасек споры выживают более 4 лет. Они теряют жизнеспособность при 90 °С. В 1%-ном растворе формальдегида и глутарового альдегида погибают через 20 минут; в 1%-ном растворе пероксида водорода - через 30 мин; в 3%-ном растворе хлорной извести и гипохлорита - через 10 минут.

Эпизоотологические данные

Аскосферозом заражается открытый расплод медоносной пчелы (рабочие, трутни, матки) с первых дней выхода личинок из яйца, однако преимущественно заражению подвержены личинки 2 - 6-дневного возраста в период смены их питания с маточного молочка на мед и пергу. Занос спор в семьи пчел пасеки происходит в основном с пыльцой и нектаром. Заражение личинок возможно алиментарным путем и при нанесении спор гриба на кутикулу.

В течение длительного времени пчелы могут удалять пораженный расплод, прежде чем гриб прорастет на поверхность их тела.

Заболевание чаще регистрируют ранней весной в перезимовавших семьях пчел, и оно продолжается в течение первой половины лета. С появлением трутневого расплода степень поражения семьи значительно усиливается. Перед главным медосбором, в середине лета, признаки поражения в некоторых семьях могут отсутствовать, но вновь появляются в отдельных ульях осенью.

Некоторые расы пчел в различной степени устойчивы к заражению. Большое значение в возникновении аскосфероза имеет также сила семей: старые матки откладывают меньше яиц, дают менее жизнеспособное потомство.

В возникновении и интенсивности проявления аскосфероза играет роль нарушение естественного баланса микрофлоры гнезда пчел. Распространяют возбудитель аскосфероза внутри семей пчел и сотов в хранилищах различные членистоногие - микофаги.

Передача возбудителя происходит при пчелином воровстве, перелетах пчел. После подсадки маток из инфицированных семей аскосфероз развивался в течение трех недель.

Гриб передается с медом и сотами, ульями и загрязненным оборудованием неблагополучных семей. Быстрое распространение болезни происходит при вывозе семей на медосбор, приобретении маток и пакетов из неблагополучных хозяйств, заготовке и реализации для кормления пчел пыльцы и меда из больных семей.

Заражение внутри семьи происходит при кормлении расплода обслуживающими его молодыми пчелами, в медовом зобике которых содержатся споры гриба. Занос спор гриба в ячейки с расплодом возможен также с тела и ротового аппарата пчел-кормилиц, участвующих в чистке ячеек сотов. В результате обмена кормом споры гриба распространяются между взрослыми членами семьи. При наличии пораженных личинок в гнезде споры пассивно распределяются внутри улья при движении воздуха.

Возникновению болезни способствуют различные стрессовые факторы. Фактически любые нарушения в содержании, кормлении, разведении пчел, приводящие к снижению резистентности расплода, нарушению или затруднению очистки гнезда рабочими пчелами, благоприятствуют возникновению и развитию аскосфероза

На возникновение и течение заболевания отчетливо влияет микроклимат внутри улья и вне него.

Заболеванию благоприятствуют:

· Переохлаждение

· Высокая влажность

· Отсутствие проветривания

· Недостаток кормов

· Избыток воды в корме за счет обильного приноса пчелами весной влажной пыльцы и воды для расплода

· Различные заболевания пчел

Пестициды, широкое, подчас неоправданное, применение различных лекарственных средств (антибиотики, сульфаниламидные препараты) для профилактики заболеваний, в частности американского и европейского гнильцов, длительное использование одних и тех же средств для борьбы с насекомыми, например с клещом варроа, способствуют заражению пчел аскосферозом, подавляя на длительное время антагонистическую грибу микрофлору в кишечнике пчел и пыльце

В результате загрязнения в среднем погибает от 53 до 88 % личинок медоносных пчел.

возбудитель заболевание пчела аскофероз

Патогенез

Пчелы заражаются спорами гриба через поверхность тела или с кормом. В первом случае на теле личинки образуется мицелий, который проникает сквозь кутикулу.

Во втором случае в задней части кишечника личинок через 18 ч после заражения споры A. apis набухают и в течение 6 часов из них выходят зародышевые трубки, образуя ветвящиеся гифы. В последующие 24 часа гифы внедряются через перитрофическую мембрану в клетки эпителия кишечника, вызывая их разрушение. В дальнейшем отмечают поражение эноцитов и жирового тела. В последующем в теле личинки увеличивается число эноцитов. В жировых клетках происходят некробиотические процессы, происходит гипертрофия мальпигиевых сосудов.

Гифы пробивают базальную мембрану кишечника, проникают в гемоцель насекомого, где прокладывают путь между клетками жирового тела, образуя скопления около трахеолей. В жировом теле отмечают вакуолизацию клеток и атрофию ядер, во всех органах и тканях личинки - деструктивные изменения. Первые видимые гифы появляются на заднем конце дорсальной поверхности личинки медоносной пчелы.

Гибель личинок медоносных пчел происходит чаще через 1 - 2 дня после запечатывания расплода, при этом мицелий быстро распространяется по поверхности тела хозяина. Этими факторами и конечными продуктами метаболизма гриба обусловлены деструктивные изменения в теле погибших личинок.

Клинические признаки

Признаки болезни наиболее выражены в начале лета. Перед летком улья, на летковой доске и дне улья видны твердые белые, бело-серые, черные мумифицированные личинки и их части. Первыми поражаются трутневые личинки, расположенные в нижних частях сотов. Мицелий пронизывает все ткани и выходит наружу, покрывая выступающий в просвет ячейки соты головной конец личинки белым войлочного вида налётом. Трупы погибших от аскосфероза пчёл личинок покрываются белым пушистым мицелием, засыхают, приобретая вид кусочков мела. Расплод пестрый, в ячейках сотов некоторые личинки вытянуты по длине ячейки, тусклые, без перламутрового блеска, желтоватого цвета, со сглаженной сегментацией, часто заполняют всю ячейку; тактильная чувствительность потеряна; такие личинки до их запечатывания пчелы часто удаляют. Многие вскрытые пчелами печатные и незапечатанные ячейки содержат сморщенные твердые мумии личинок и предкуколок или их остатки; мумии занимают 2/3 ячеек, и при встряхивании сота с печатным расплодом они гремят. Мумификация личинок наступает на 4 - 7-й день после перорального заражения, таких личинок обычно находят в печатном расплоде. Процессу обызвествления подвергаются далеко не все погибшие личинки, часть из них не мумифицируется. Удаляя мумии из ячеек, пчелы нередко выгрызают погибший расплод, делают поверхность сота неровной, холмистой, покрытой ячейками с изъеденными краями.

Течение аскофероза пчёл:

· Латентное

· Доброкачественное

· Злокачественное

При латентном течении:

· Мумифицирования личинок не происходит

· На соте разбросан разновозрастной расплод и имеются пустые ячейки

· семьи плохо развиваются, часто меняют маток

Доброкачественное течение отмечают у многих семей пчел в конце зимовки. Оно характеризуется наличием единичных (до 10) погибших личинок на соте. К середине сезона погибшие личинки полностью удаляются, семьи нормально развиваются и активны в медосборе. Однако, возможны рецидивы

При злокачественном течении обычно возникающее весной поражение постепенно усиливается, сила семей неуклонно сокращается, гибель расплода достигает 85 - 95 %, матки прекращают яйцекладку. Семья гибнет в середине лета или осенью иногда отмечают слет пчел. Злокачественное течение аскосфероза часто преобладает в семьях пчел, содержащихся в условиях закрытого грунта (в теплицах, оранжереях).

Инфицированные личинки в начале заболевания становятся желто-белыми, потом светло-желтыми, мягкими тестообразными, блестящими. В дальнейшем они покрываются белым грибным мицелием, который заполняет свободное пространство ячеек. Мицелий толстым слоем покрывает нижнюю часть личинок, слабее - спереди, и остается свободной от него подсохшая головная часть. Мумия личинок, объем которых уменьшается, становятся твердыми.

Вследствие разнополости гриба имеется две картины заболевания. Если в ячейке имеется один из полов с проросшим мицелием, то плодовые тела не образуются и цвет личинки белый или желто-белый.

В случаях попадания в ячейку женского и мужского мицелия на поверхности и внутри личинки образуются цисты, которые придают мертвой личинке, обычно погибающей в стадии предкуколки, грязно-коричневый цвет. Возбудитель поражает в первую очередь трутневый расплод предположительно в связи с тем, что влажность и температура на краю гнезда (30 °С) благоприятнее для развития гриба, чем в расплодной части. Инфицированные личинки размещаются беспорядочно между заболевшим расплодом и создают впечатление здоровых. Больные предкуколки лежат мумифицированными в открытых, распечатанных пчелами ячейках или еще не распечатанных, крышечки которых в большинстве нормальные, однако иногда пятнистые или несколько проваленные.

У мумифицированных особей коконы почти готовы и, поскольку не прикреплены к донышкам и стенкам, могут быть легко извлечены из ячеек пинцетом. В нераспечатанных ячейках мумии, если сот потрясти, издают характерный «брякающий» звук и выпадают из ячеек, если удалить крышечки.

На стационарно неблагополучных пасеках расплод может поражаться на 60-70%. На дне улья и «взлетной» площадке скапливается большое количество выброшенных пчелами трупов, в результате пчелиная семья резко слабеет.

Постановка диагноза

Диагноз на аскосфероз ставят комплексно с учетом:

· клинико-эпизоотологических и патологоанатомических данных

· подтверждают результатами лабораторных исследований

В лабораторию направляют образцы сотов с больными и погибшими личинками и куколками. Соты осматривают, выделяют из ячеек мумии личинок (лучше серого, темного, белого цвета с пятнами), делают с них соскоб мицелия и микроскопируют. В положительном случае обнаруживают гифы мицелия, характерные цисты с шарами, заполненные спорами.

Для получения чистой культуры делают посевы стерильно разделенных мумий личинок. Посевы инкубируют при 24 - 30 °С и наблюдают за ними в течение 10 суток. Из выделенных культур готовят мазки и микроскопируют их.

Исследования проводят в соответствии с методическими указаниями по лабораторной диагностике аскосфероза и выделению возбудителя из пыльцы (перги).

Аскофероз следует дифференцировать от: грибов родов Aspergillus, Penicillium, Mucor и других, иногда вторично присутствующих на погибших от аскосфероза личинках в семьях пчел, нередко протекающего совместно с аскосферозом аспергиллеза

Профилактика

Для предупреждения аскосфероза необходимо четко соблюдать правила содержания, кормления и разведения пчел и выполнять мероприятия по предупреждению заноса и распространения других заболеваний, приводящих к ослаблению семей пчел.

Зимовник должен быть сухим, чистым, непромерзающим, оборудованным регулируемой вентиляцией. Весной пчел пересаживают в чистые сухие ульи, очищают деревянные части рамок; удаляют пустые рамки, рамки со следами фекалий пчел и заплесневевшим кормом; гнездо сокращают до силы семьи и хорошо утепляют, периодически меняют утепления на чистые, сухие.

Гнезда пчел расширяют постепенно, по мере увеличения силы семей. Лучшие результаты по предупреждению появления аскосфероза ранней весной дает содержание пчел в терморегулируемых ульях с подогревом или в сжатом гнезде.

Пчел содержат в сухих без щелей ульях, крышки должны плотно прилегать к корпусу и не пропускать воду. Ульи устанавливают в сухих, хорошо освещенных солнцем местах, комплектуют новыми или продезинфицированными чистыми сотами, бывшими в эксплуатации не более 2 - 3 лет. Следует избегать осмотра семей при влажной погоде.

Создавая отводки, строго следят, чтобы число взрослых пчел соответствовало площади расплода как в старой, так и во вновь создаваемой семье. На пасеке принимают меры по недопущению пчелиного воровства.

Своевременное обеспечение пчел кормами, особенно полноценной пыльцой, является важным условием предупреждения аскосфероза. Наибольшей биологической активности обладает свежая пыльца, собранная пчелами весной. Хорошо стимулируют активность откладки яиц маткой побудительные подкормки качественным медом весной.

Осенью необходимо проверять мед на наличие пади; после выхода пчел из расплода следует собрать гнездо пчел для зимовки.

На пасеке проводят отбор устойчивых семей пчел с хорошо выраженным гигиеническим поведением. Эти семьи размножают (создание отводков, воспитание маток), заменяя ими менее устойчивые. Устойчивость семей во многом определяет их сила, более развитые семьи лучше противостоят заражению.

Профилактика аскосфероза обязательно включает борьбу против других заболеваний, ослабляющих резистентность пчел.

Одним из главных моментов профилактики заболевания является поддержание санитарного состояния в ульях, на территории пасеки, в сотохранилищах и местах хранения оборудования; необходима ежегодная дезинфекция сотов, ульев и инвентаря раствором пероксида водорода с муравьиной кислотой с последующим промыванием и просушкой.

Лечение

Для лечения аскосфероза пчел испытано и предложено большое число различных средств (нистатин, азоловые и йодистые препараты и другие), однако их использование всегда требует предварительного удаления погибшего расплода из улья, пересадки взрослых пчел в чистые ульи, создания безрасплодного периода и замены маток. Для усиления очистки взрослыми пчелами сотов при слабом поражении соты опрыскивают раствором сахара. Объем гнезда максимально сокращают и при необходимости гнездо утепляют.

Только после выполнения указанных работ применяют лечебные препараты согласно наставлениям. Лучший эффект дает использование медикаментозных средств совместно с пыльцой, белковыми заменителями. Эффективен новый препарат - апилинол на основе эфирных масел растений.

После перегона пчелиных семей в продезинфицированные ульи проводят их лечение одним из нижеперечисленных препаратов: аскоцин, аскостатин, дикобин, дикобин-Б, нистатин, гризеофульвин (при температуре окружающего воздуха не ниже 14градусов).

Аскоцин выпускается в ампулах по 1?2 мл в виде 25%-ного концентрата эмульсии. Перед тем, как начать лечение, готовят маточный раствор, растворяя содержимое одной ампулы в 30мл теплой кипяченой воды. Такой маточный раствор вносят в 5 л сахарного сиропа (1:1-при лечебной подкормке) и в 3,5?4 л сахарного сиропа (1:5-при орошении сотов) и тщательно перемешивают. Лечебный сахарный сироп скармливается из расчета 60?70 мл (г) на улочку пчел. При орошении открытого расплода и сотов из аппарата типа «Росинка» расход жидкого сахарного сиропа (медовой соты) должен составлять 15 мл на каждую соторамку. Лечебную подкормку (орошение) проводим 2?3 раза, с интервалом 3?5дней.

Работая с аскоцином пчеловод должен использовать средства индивидуальной защиты: спецодежду, резиновые перчатки, защитные очки, респираторы, соблюдать правила личной гигиены, категорически запрещается пользоваться открытым огнем. Откачку меда можно проводить спустя 15 суток после последней обработки пчелиных семей.

Дикобин и Дикобин-Б выпускают в ампулах из светлого или темного стекла по 1?2мл. Препараты применяют с лечебной целью весной и осенью. Предварительно за 15?20 минут до начала обработки готовится рабочий раствор, для чего в 500 мл охлажденной кипяченой воды выливают 2 мл концентрата и хорошо перемешивают. Рабочий раствор распыляют на соторамки с находящимися на них пчелами, на одну рамку расходуют по 2?4 мл раствора. Одновременно обрабатывают и стенки улья. Обработку больных семей проводят 2?3 -кратно, с интервалом между обработками в 7 дней. При обработке соблюдать правила личной гигиены.

Нистатин - антибиотик, используемый для приготовления лечебной подкормки пчел. При приготовлении подкормки 500 000 ЕД антибиотика растворяют в 1 литре сахарного сиропа. Подкормку пчелиным семьям дают трехкратно, по 100?150 мл на улочку пчел, с интервалом в 5 дней. Летом соты с находящимися на них пчелами орошают при помощи мелкодисперсного растворителя 20%-ным теплым сахарным сиропом с нистатином (500 000 ЕД нистатина на 1 литр сиропа) трехкратно, с интервалом в 3 дня; на каждую соторамку расходуется по 20 мл лечебного сиропа.

Проведенное лечение не исключает последующих рецидивов заболевания при отсутствии радикальных мер по устранению недостатков, связанных с ослаблением семей пчел.

Дополнительные меры борьбы

На неблагополучную пасеку накладывают ограничения: запрещают заготовку пыльцы, воска, использование меда и перги для подкормки пчел; воск, полученный от больных семей, направляют на технические цели. Пасеку объявляют благополучной и снимают ограничения после ликвидации болезни и проведения заключительной дезинфекции.